Pewarnaan gram merupakan pewarnaan diferensial yang sangat berguna dan paling banyak digunakan dalam laboratorium mikrobiologi, karena merupakan tahap penting dalam langkah awal identifikasi. pewarnaan ini didasarkan pada tebal dan tipisnya lapisan peptidoglikan di dinding sel dan banyak sedikitnya lapisan lemak pada membran sel bakteri.
Jenis bakteri berdasarkan pewarnaan gram dibagi menjadi dua yaitu, bakteri gram positif dan gram negatif. Bakteri gram positif memiliki dinding sel yang tebal dan membran sel selapis. sedangkan, bakteri gram negatif mempunyai dinding sel tipis yang yang berada diantara dua lapisan membran sel.
Prosedur pewarnaan gram:
Buat preparat ulas (smear) yang telah difiksasi dari bakteri gram positif misal Bacillus subtilis dan gram negatif misal Eschericia coli
1. Teteskan kristal violet sebagai pewarna utama pada preparat, usahakan semua ulasan terwarnai dan tunggu selama kurang lebih 1 menit
Bilas dengan akuades mengalir
2. Teteskan iodin , dan tunggu kurang lebih 2 menit
Bilas dengan akuades mengalir
3. Bilas dengan alkohol 95%, setetes demi setetes selama 30 detik. Jangan sampai terlalu banyak (Overdecolorize)
Bilas dengan akuades mengalir
4. Teteskan safranin dan tunggu selama kurang lebih 30 detik
Bilas dengan akuades mengalir
Preparat yang telah diwarnai dikeringkan dengan kertas tissue, dan dilakukan pengamatan dibawah lensa mikroskop.
Bakteri gram positif ditunjukan dengan terlihatnya sel bakteri yang berwarna ungu sedangkan bakteri gram negatif ditunjukan dengan terlihatnya sel bakteri yang berwarna merah muda (pink).
Hal-hal yang perlu diperhatikan selama pewarnaan gram adalah sebagai berikut:
* Fase yang paling kritis pada tahapan diatas adalah tahap dekolorisasi yang mengakibatkan iodin lepas dari sel. Pemberian alkohol 95% jangan sampai berlebihan yang akan menyebabkan overdecolorization sehingga sel gram positif tampak seperti gram negatif. Namun juga jangan sampai terlalu sedikit dalam penetesan alkohol 95% yang akan menyebabkan underdecolorization dan tidak akan melarutkan iodin secara sempurna sehingga sel gram negatif seperti gram positif.
*Preparasi pewarnaan gram terbaik adalah megguanakan kultur muda yang tidak lebih dari 24 jam. umur kultur akan mempengaruhi kemampuan sel menyerap warna utama kristal violet, khususnya pada gram positif. mungkin akan menampakkan gram variabel yaitu satu jenis sel, sebagian berwarna ungu dan sebagian berwarna merah karena pengaruh umur. Walaupun ada beberapa spesies yang memang bersifat gram variabel seperti pada genus Acinobacter dan Arthrobacter.
0 komentar:
Posting Komentar